PCR reactions were treated with exonuclease I and shrimp alkaline phosphatase (ExoSAP-IT, USB Corporation, Cleveland, OH, USA) and sequence reactions were performed by ABI Big Dye Terminator (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) chemistry and analysed by ABI PRISM 3130xl Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). 3.3. In Silico Analysis. Alamut v1.4 (http://www.interactive-biosoftware.com (accessed on 8 June 2022)); With respect to the missense mutation, the evaluation of the risk of pathogenicity was thus the result of the following individual tools integration: With respect to the intronic mutation, the integrated tools included: MaxEntScan; 4. Results. Sequences from Mutation Surveyor v3.30 reporting the mutations found in Patient n.1, Patient n.2 and their parents. ( a ) Patient n.1 missense mutation HSD3B2 c.370 A>G.
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